蜂產品中蛋白質的測定主要采用凱氏定氮法,其測定結果穩定可靠,被廣泛采用。但其操作較繁雜,消化時間長,需蒸餾滴定,費時費力。本法通過改進消化條件,即采用過氧化氫2濃硫酸混合液為消化液,消化過程中滴加硝酸2高氯酸混合酸,縮短了消化時間。樣品中的蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱分解,生成的氨與硫酸反應生成硫酸銨,硫酸銨在堿性溶液中與次氯酸鹽生成一氯胺,在亞硝基鐵氰化鈉催化作用下與水楊酸生成藍色化合物,可在655 nm 波長下比色定量。

1 　試驗部分

1. 1 　儀器與試劑

定氮儀；可見分光光度計。顯色劑:稱取水楊酸5. 0 g ,加入水20 mL ,加入2 mol ·L - 1 氫氧化鈉溶液16 mL ,凱氏定氮儀；攪拌使之完全溶解,再取5. 0 g 酒石酸鉀鈉溶于少量水中,將上述溶液合并移入100 mL 容量瓶中,用水稀釋。次氯酸鈉溶液:取經標定的次氯酸鈉溶液用氫氧化鈉溶液稀釋成含有效氯的質量濃度為3. 5 g ·L - 1 ,游離堿濃度為0. 75 mol ·L - 1 (以氫氧化鈉計) 。亞硝基鐵氰化鈉溶液:稱取亞硝基鐵氰化鈉(硝普鈉) 1. 0 g ,溶于少量純水中,并稀釋至100 mL ,質量濃度10 g ·L - 1 。氨氮標準溶液: 臨用時稀釋成質量濃度為1. 0 mg ·L - 1氨氮的標準工作溶液。試劑均為分析純,水為無氨去離子水。

1. 2 　試驗方法

1. 2. 1 　樣品處理

稱取樣品2. 0 g 于250 mL 定氮瓶中,加入硫酸銅0. 5 g ,硫酸鉀5. 0 g ,硫酸2過氧化氫(2 + 1) 混合液20 mL ;搖勻后于瓶口放一小漏斗,置于有石棉網的可調電爐上,小火加熱,至泡沫停止后,加大火力,緩慢分次滴加硝酸2高氯酸(4 + 1) 混合酸2～3 mL ,樣液變藍透明后,繼續加熱30 min ,取下放冷后,加水20 mL ,冷卻后分次洗入500 mL (蜂蜜消化液洗入250 mL) 容量瓶中。移取樣品消化液5. 0 mL 于另一個100 mL 容量瓶中,加水至刻度備用,同時作試劑空白。

1. 2. 2 　樣品分析

移取樣品溶液與試劑空白液2. 0～5. 0 mL ,1. 0 mg ·L - 1 氨氮標準工作溶液0 , 0. 50 , 1. 00 ,2. 00 ,4. 00 ,6. 00 ,8. 00 mL 分別于10 mL 具塞比色管中,往樣品管、試劑空白管及標準管中加顯色劑1. 0 mL ,10 g ·L - 1 亞硝基鐵氰化鈉溶液0. 2 mL ,3. 5 g ·L - 1 次氯酸鈉溶液0. 2 mL ,用水稀至刻度,混勻,靜置60 min 后,于655 nm 波長處,用1. 0 cm比色皿,測定其吸光度,繪制標準曲線,計算樣品溶液中蛋白質的含量。

2 　結果與討論

2. 1 　工作曲線

按試驗方法對標準系列溶液進行測定,氮的質量濃度在0～0. 8 mg ·L - 1 范圍內呈線性關系,對試劑空白測定20 次,其3 倍的標準偏差為檢出限,其檢出限為0. 014 mg ·kg - 1 。

2. 2 　精密度試驗

取蜂王漿、花粉、蜂蜜樣品,按試驗方法進行6次測定,樣品測定值的相對標準偏差(RSD) 結果見表1 。

2. 3 　水楊酸法與凱氏定氮蒸餾法測定結果比較

隨機抽取了8 份峰產品樣品,分別用水楊酸法和凱氏定氮蒸餾法對樣品中蛋白質進行測定,測得結果經t檢驗, t = 0 . 153 ,查t值表, t0. 05 (7) = 2 . 356 ,

 

所以P > 0. 05 ,兩方法測定蜂產品中蛋白質無顯著性差異。結果見表2 。

2. 4 　回收率試驗

取蜂王漿、花粉、蜂密樣品,加入氨氮標準溶液,按試驗方法進行樣品處理與測定,回收率測定結果見表3 。

通過改進蜂產品蛋白質消化的條件,有效地縮短了反應時間,由原來的3. 5 h 縮至2 h 左右。由于水楊酸光度法樣品消化液不需要蒸餾,直接用于測定,更適宜于批量樣品的測定,水楊酸光度法與國標法比較無顯著性差異,所以水楊酸光度法因其操作簡便、準確、迅速,可用于蜂產品中蛋白質的測定。